Display Diferencial (DD) é uma técnica amplamente utilizada em estudos de expressão diferencial. A maioria desses estudos envolvendo espécies de peixes está restrita a espécies da América do Norte e Europa ou a espécies comerciais, como os salmoniformes. Estudos relacionados a peixes da América do Sul são ainda pouco explorados. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo descrever modificações na técnica de DD, a fim de melhorar os resultados relacionados ao isolamento de DETs (Transcritos Diferencialmente Expressos), utilizando Leporinus macrocephalus, peixe explorado comercialmente na América do Sul, como espécie para tal delineamento. Diferentes abordagens de DDRT-PCR foram desenvolvidas a partir de amostras de tecido cerebral e os produtos das reações foram analisados em gel de poliacrilamida 6% corados com 0,17% de nitrato de Prata (AgNO3). A utilização de reações de PCR sob condições de elevada estringência e oligonucleotídeos mais longos, com base em sequências cerne de VNTR (Número Variável de Repetições em Tandem), mostrou melhores resultados quando comparada a condições de baixa estringência e ao uso de oligonucleotídeos decâmeros. A estratégia empregada permitiu o isolamento de transcritos diferencialmente expressos em machos e fêmeas adultos de L. macrocephalus. Este estudo evidencia que modificações no método de DDRT-PCR garantem o melhor isolamento de DETs a partir de diferentes tecidos de peixes e asseguram a obtenção de dados mais sólidos relacionados a essa abordagem.

Differential Display (DD) is a technique widely used in studies of differential expression. Most of these analyses, especially those involving fish species, are restricted to species from North America and Europe or to commercial species, as salmonids. Studies related to South American fish species are underexplored. Thus, the present work aimed to describe DD technique modifications in order to improve outcomes related to the isolation of DETs (Differentially Expressed Transcripts), using Leporinus macrocephalus, a large commercially exploited South American species, as a fish design. Different DDRT-PCR approaches were applied to brain samples and the products of the reactions were analyzed on 6% polyacrylamide gels stained with 0.17% Silver Nitrate (AgNO3). The use of PCR reactions under high stringency conditions and longer oligonucleotides based on VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) core sequences led to better results when compared to low stringency PCR conditions and the use of decamer oligonucleotides. The improved approach led to the isolation of differentially expressed transcripts on adult males and females of L. macrocephalus. This study indicates that some modifications on the DDRT-PCR method can ensure isolation of DETs from different fish tissues and the development of robust data related to this approach.

Microsatellite markers were analyzed in Japanese quails, Coturnix japonica, using different methodologies (PAGE and automated genotyping), in order to evaluate their use in paternity testing. Ten animal triplets composed by a female and two males were used to mate and generate an offspring. Paternity was determined in five-day-old embryos, and the data generated by fluorescent labeled and tailored primers in PCR and further automated genotyping were robust. Three microsatellite markers were polymorphic (Na = 5-8, H E = 0.75) and no loci were found to deviate significantly from Hardy-Weinberg equilibrium or showed any evidence of linkage disequilibrium (p > 0.05). A slight heterozygote deficiency and some incompatibilities between the female known parent and its offspring that involved homozygous genotypes were observed at GUJ0001 locus and may indicate the presence of null alleles. Although a reduced set of microsatellite primers were applied, it was possible to determine the paternity of 96.87% of the embryos, using combined data of three loci. The approach was useful for parentage inferring in a captive population of C. japonica and the results evidenced a potential polyandric mating system in the species, in which no advantage mechanism of last-male sperm precedence seems to occur.

Análises citogenéticas foram realizadas em duas espécies de Curimatidae (Steindachnerina insculpta e Cyphocharax modestus) provenientes dos rios Paranapanema e Tietê (Estado de São Paulo, Brasil), evidenciando um cariótipo composto por 54 cromossomos meta-submetacêntricos em ambas as espécies. Coloração com nitrato de prata e cromomicina e hibridação in situ fluorescente (FISH), utilizando uma sonda de DNAr 18S, mostraram que as regiões organizadoras de nucléolos (RONs) de ambas as espécies estão localizadas na região terminal do braço longo de dois cromossomos metacêntricos. Embora as espécies analisadas tenham apresentado um sistema de RONs simples, S. insculpta e C. modesta apresentaram as regiões organizadoras de nucléolos em distintos pares de cromossomos, indicando que estes cístrons podem ser considerados marcadores citogenéticos. Variação na quantidade e distribuição de heterocromatina constitutiva (bandas C) também pôde ser detectada entre as duas espécies - enquanto S. insculpta apresentou poucos blocos heterocromáticos, bandas C intensamente coradas foram evidenciadas em C. modesta especialmente na região terminal do braço longo dos cromossomos portadores de RONs. Embora a maioria das espécies de Curimatidae seja caracterizada por cariótipos homogêneos, populações isoladas podem ter se estabelecido sob condições ambientais distintas, levando à ocorrência de variações na micro-estrutura cariotípica especialmente relacionadas à localização das RONs e à distribuição das bandas C. Os dados obtidos mostraram-se úteis para caracterização e diferenciação citogenética de S. insculpta e C. modesta e podem ser utilizados em inferências evolutivas no grupo Curimatidae.

Cytogenetic analyses were performed in two Curimatidae species (Steindachnerina insculpta and Cyphocharax modesta) from the Paranapanema and Tietê Rivers (São Paulo State, Brazil), showing a karyotype composed of 54 meta-submetacentric chromosomes in both species. Silver- and chromomycyn-staining and fluorescent in situ hybridization (FISH) using a 18S rDNA probe indicated that the nucleolar organizer regions (NORs) of both species are localized in the terminal region of the long arm of two metacentric chromosomes. Although a single NOR system was evidenced in both analyzed species, S. insculpta and C. modesta presented the nucleolar organizer regions in distinct chromosome pairs, indicating that these cistrons can be considered cytogenetic markers. Variation on the amount and distribution of the constitutive heterochromatin (C-bands) could also be detected between the two species - while S. insculpta presented few heterochromatic blocks, intensely stained C-bands were evidenced in C. modesta specially in the terminal region of the long arm of the NOR-bearing chromosomes. Although most Curimatidae species have been characterized by homogeneous karyotypes, isolated populations could be established under different environmental conditions leading to karyotype micro-structure variations specially related to the NORs localization and C-banding distribution. The obtained data were useful for the cytogenetic characterization and differentiation of S. insculpta and C. modesta and could be used in evolutionary inferences in the Curimatidae group.